细胞支原体污染的影响、检测方法及清除方法

支原体简介

支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体

细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。

支原体是在 1898 年发现的，又称人形支原体，是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和

病毒之间。结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较

大的可变性。支原体的大小为 0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻

烦。菌落小（直径 0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁，不能

维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。

支原体污染的来源

包括工作环境的污染、操作者本身的污染（一些支原体在人体是正常菌群）、培养基的

污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织

或器官的污染。

支原体污染对细胞的影响

1、影响细胞的生长状态及形态

支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止；细

胞状态变差，生长变慢，在显微镜下观察可能会有小黑点，但培养基一般不发生浑浊。会导

致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。细胞传

代以后就出现细胞间黑点，细胞空泡化，很多类似凋亡、坏死的细胞，最终细胞漂浮，完全

死亡。

2.影响细胞的代谢和功能

（1）培液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA 的合成

障碍；

（2）支原体活动使培养基成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响

细胞代谢；

（3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；

（4）支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常。

3、其他

此外，支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响

淋巴细胞分化等。

支原体污染的检测方法

1、培养法

原理是利用营养丰富的培养基，直接对待检细胞、血清等进行支原体培养。

缺点：灵敏度低，试验周期长，不能检测到种且不适用于检测所有支原体。

2、DNA 荧光染色法

利用荧光 Hoechst33258标记细胞和支原体 DNA,在紫外光(波长为 630 nm)激发下产生黄绿色荧光，利用荧光显微镜观察支原体是否存在。

缺点：有时易出现假阴性和假阳性

3、聚合酶链反应(PCR)法

通过扩增被检测标本中的支原体 DNA ,再进行琼脂糖凝胶电泳。电泳完毕，将电泳胶在

紫外投射仪下观察，根据标准分子量及阳性对照、内对照条带，观察待测样品中是否有阳性

条带

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阅读：  2016-04-15 11:31:20