PCR产物回收试剂盒说明书

（Rev.A）

产品介绍

本试剂盒可从PCR反应体系中回收得到不含盐或低盐、不含蛋白质、RNA 等杂质的高纯度DNA 片段。200bp-10kbp的DNA片段回收率 80%以上，并可回收单链、双链 DNA片段以及环状质粒 DNA。回收得到的片段DNA均可直接进行酶切、酶连、测序反应。

试剂盒组成

一、使用前准备

Buffer PG：开盖后如果长时间未使用，请检查Buffer PG的pH，确保pH≤7.5。

WB: 使用前请将6 ml(5T装)/60 ml（50T装）/240 ml（200T装）无水乙醇加入Buffer WB（试剂瓶上有标签提示）。

二、操作步骤

1.   按照PCR产物：Buffer PG=1:5的比例加入Buffer PG（例如：50 μl PCR反应体系加入250 μlBuffer PG），颠倒混匀。若片段长度小于500 bp，按照1:6的比例加入Buffer PG。

2.   （选做）将装有混合液的EP管转至高速离心机，室温下10,000×g离心30 sec到1min，以甩下吸附在离心管壁的残留溶液，最大限度提高回收率。

3.   将上一步得到的混合液添加至本试剂盒提供的吸附柱G柱中（如一次无法加完，可分多次加入），室温下10,000×g离心1 min。弃掉收集管中的废液。如有需要，此步骤可以重复一次，对低浓度的核酸回收率有较明显提高。

4.   向吸附柱G柱中加入700 μl Buffer WB ，室温下13,000×g离心1 min ，弃废液。

5.   重复步骤4。

6.   室温下13,000×g离心2 min以彻底甩下Buffer WB的残留。

7.   取出吸附柱G柱并放入新的EP管中，将吸附柱G柱开盖室温下静置2 min，如有需要可放在空调风口吹1-2 min，以彻底去除残留的乙醇。

8.   向吸附柱G柱正中间加入15-50 ?l （建议用量为30μl）Elution Buffer或ddH₂O（50℃水浴后的溶解液溶解效果更好），静置5 min待吸附的质粒完全溶解，室温下13,000×g离心2 min即得到回收的DNA片段。

注：回收得到的 DNA可直接用于基因克隆、扩增、测序、酶切等。

三、DNA浓度及纯度

DNA浓度(?g/ml) = OD₂₆₀× 50×稀释倍数，OD₂₆₀/ OD₂₈₀约为1.8-2.0。

四、注意事项

本试剂盒只适用于琼脂糖凝胶电泳产物回收，不适用于聚丙烯酰胺凝胶回收。试剂盒中各成分均有一定的挥发性，请使用完后立即盖紧瓶盖，以防试剂污染或者挥发而造成效果降低。

五、常见问题及解答