2×Magic⁺PfuPreMIX说明书

（Rev.C）

产品组成

产品说明：本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、电泳指示染料，浓度为2×。具有超高保真性、灵敏度高、特异性强、稳定性好，无需额外添加Loading Buffer等优点，可最大限度的减少使用者的工作强度，减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物并补足所需要的水即可。

产品内容：Pfu DNA Polymerase ：0.05units/?l ；MgCl₂： 4mM ；dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)：0.2mM；指示染料：0.05%。

质量控制： SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残留DNA；能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，活性无明显改变。

适用范围：一般DNA片段的扩增、DNA标记、DNA序列测定。

建议的PCR反应体系：（以50μl反应体系为例）

50 μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

建议的PCR反应条件

注意事项：

1、本产品提供的酶量可进行多次反应，配置过程应将酶尽量放在冰上进行。

2、PCR的反应液请在冰上配制，然后置于PCR扩增仪上进行PCR反应。这种冷启动法（Cool Start Method）可增强PCR扩增的特异性，减少PCR过程中的非特异性反应，能得到良好的PCR结果。

3、PCR反应后，无需额外加入DNA Loading Buffer，可直接加入凝胶孔进行电泳。

可能出现的问题及解决方案：

1．假阴性，不出现扩增条带
　　PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备②引物的质量与特异性③酶的质量④PCR循环条件。寻找原因应逐个排除。

2．假阳性
　　出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。原因可能是引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。

3．出现非特异性扩增带
　　PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg²⁺浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。Mg²⁺浓度或者重新设计引物即可解决。

4．出现片状拖带或涂抹带
　　PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg²⁺浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。也需逐个排除。